뇌 조직 분양 신청 가이드

인체 유래 뇌 조직은 재생 불가능한 매우 제한적이고 희소한 자원이므로, 연구자는 실험 목적과 연구 설계에 따라 필요한 최소 수량만 신청하여야 합니다. 본 가이드는 시료 유형에 따라 Fresh frozen tissue와 FFPE slide로 구분하여 작성하였으며, Fresh frozen tissue는 DNA/RNA 기반 분석(ex. short-read transcriptome sequencing, long-read transcriptome sequencing, methylation array) 및 protein 기반 분석(western blot) 을 위한 시료로, FFPE slide는 병리 판독 및 염색 분석을 위한 시료로 활용됩니다.

모든 뇌 조직 분양은 1차 분양과 추가 분양 체계로 운영되며, 추가 분양은 시료 유형과 관계없이 반드시 1차 분양 결과 및 실험 데이터 제출을 전제로 합니다. 연구자께서는 아래 기준과 산출식을 참고하여 필요한 조직 중량 또는 슬라이드 수를 사전에 검토한 후 신청하여 주시기 바랍니다.

※ 제출 시 유의사항

1차 분양은 초기 탐색 목적의 최소 단위 분양으로, 필요한 최소 수량만 신청하여 주시기 바랍니다.

추가 분양을 희망하는 경우, 유의미한 결과 여부와 관계없이 1차 분양으로 수행한 전체 실험 결과를 제출하여야 합니다.

추가 분양 신청 시에는 추가 분양 신청서, 1차 실험 결과, 추가 분양 산출표(해당 서식)를 반드시 함께 제출하여야 합니다.

추가 분양 필요성은 1차 결과에 근거하여 구체적으로 제시되어야 하며, 포괄적 또는 예비적 요청은 제한될 수 있습니다.

❶ DNA/RNA 기반 분석 Fresh Frozen 분양

1. 분양 신청 기준

[1차 분양: 초기 탐색 및 QC 목적]

신청 범위: 질환당 최대 3 case까지 신청 가능합니다.

작성 필수 항목:

① 수행 예정 실험:

(예: Short-read transtriptome sequencing, Long-read transcriptome sequencing, Methylation array 등)

② 실험에 필요한 목표 DNA/RNA 양 (total μg):

(맡기시려는 업체의 기준이나 Library kit 기준.)

→ 분양 심의 진행 후 협의하여 조직양 결정.

※ 참고: 뇌 조직(Frozen FT) “10mg”당 기대 수율 (내부 QC 데이터 Column or Bead extration kit 기준)

DNA: Total 2.1μg 확보 가능 (평균 농도 53.2 ng/μl, elution 40 μl 기준)

RNA: Total 4.1μg 확보 가능 (평균 농도 99.6ng/μl, elution 40 μl 기준)

위 수치는 조직 상태 및 추출 방식에 따라 차이가 있을 수 있으며, 신청 시 목표로 하는 Total μg을 기재해 주시면 협의를 통해 최종 중량을 결정합니다.

[추가 분양: 후속 검증 및 확장 목적]

신청 조건: 다음 사항들을 제공해주셔야 합니다.

1) 1차 분양 샘플의 추출 QC 결과(사용한 조직의 양, 농도, RIN score 등)는 가급적 제출해주시고, 실험 결과 데이터 제출 간략하게 요약해주셔도 됩니다.

2) 1차 결과를 바탕으로 한 추가 분양의 구체적 사유 (가설 검증 등)

3) 아래 산출식을 통한 필요 조직량 제시

2. 추가 분양 산출 기준 (Calculation Formula)

실험 플랫폼의 요구 사양에 근거하여 필요량을 산출해야 합니다.

추가 분석 대상 질환 및 case 수

실험 1회당 필요한 DNA/RNA 양 (total μg)

3. 분양 신청서 작성 서식

3-1. 1차 분양 신청 서식

신청 질환/대조군:

case별 신청 중량(mg): (최대 수량 협의 필요)

수행 예정 실험:

(예: Short-read transtriptome sequencing, Long-read transcriptome sequencing, Methylation array 등)

수행 예정 실험에 필요한 DNA/RNA 양:

조직 사용 목적:

(예: 특정 뇌 부위의 DNA 메틸화 패턴 탐색)

3-2. 추가 분양 신청

1차 수행 내역: 1차 분양 case 및 획득한 DNA/RNA 정보

1차 결과 요약
- 유의미한 결과 유뮤: □ 있음 / □ 없음
- 주요 결과 요약:
- 제출 데이터 목록:
※ 유의미한 결과가 없더라도 실험 데이터 전체를 정리하여 반드시 제출하여야 합니다.

추가 필요 사유: (예: 1차 분석에서 확인된 결과의 통계적 검증을 위해 대상군 확대 필요)

산출 근거: 실험 플랫폼 권장 DNA/RNA 투입량 및 수율 계산표 별첨

❷ Protein 기반 분석 Western blot용 Fresh Frozen 분양

1. 분양 신청 기준

[기본 참고 수치]

단백질 추출 수율: 뇌 조직((wet weight) 1 mg 당 약 100 µg의 총 단백질(Total protein) 추출 가능

WB 1 Lane 권장 로딩량: 10 ~ 40 µg (타켓 단백질의 발현량에 따라 최적화 필요)

[실험 및 분양 신청시 고려사항]

물리적 파쇄의 한계: 1~2 mg의 미세한 조직을 물리적으로 갈아내려면(Homogenization) 버퍼(Lysis buffer)의 양도 10~20 µL로 극히 적어야 하므로 현실적으로 파쇄 효율이 매우 떨어집니다.

최소 권장 신청량: 시약 제조사의 권장 버퍼 비율(조직 10 mg 당 Lysis buffer 100 µL)을 맞추어 물리적 파쇄 효율을 높이고 샘플 손실을 막기 위해, 최소 5mg ~ 10mg을 기본 단위로 신청하시는 것을 권장합니다.

샘플 활용 극대화: 10 mg의 조직을 파쇄하면 약 1,000 µg의 충분한 단백질을 얻을 수 있습니다. 이는 여러 타겟 마커를 넉넉하게 확인할 수 있는 양이므로, 가능한 한 하나의 샘플에서 최대한 많은 마커 및 데이터를 확보하도록 실험을 설계하여 주시기 바랍니다.

신청량 설정 시 권장 기준:

- 단일 마커 분석 목적이라도

→ 추가 마커 및 validation을 고려하여 여유 있게 신청

- low-abundance protein의 경우

→ higher loading (30–40 µg/lane) 기준으로 계산 권장

- pilot experiment 경험이 없는 경우

→ 최소 10 mg 기준으로 설계 권장

2. 조직 소요량 산출 기준 (Calculation Formula)

조직 소요량은 아래의 두 단계를 거쳐 계산할 수 있습니다.

[Step 1] 총 필요 단백질량 (µg) 계산

= (1 Lane 당 로딩량 µg) × (반복수 Replicates) × (확인할 마커 수) + 여유분(Dead volume)

※ BCA 정량 소모, 파이펫팅 오차, 끓임 과정의 증발 등을 고려해 순수 필요량의 1.5~2배를 총 필요량으로 잡는 것을 권장합니다.

[Step 2] 이론적 필요 조직량 (mg) 계산

= [Step 1] 에서 계산된 총 필요 단백질량 (µg) ÷ 100 (µg/mg)

3. 산출 예시 (마커 1개, 3반복 기준)

로딩 기준	순수 필요 단백질	여유분 포함 (약 1.5배)	이론적 최소 조직량
20 µg / lane	60 µg (20 × 3)	약 90 ~ 100 µg	0.9 ~ 1.0 mg
30 µg / lane	90 µg (30 × 3)	약 135 ~ 150 µg	1.3 ~ 1.5 mg

5. 실제 산출표 (마커 ____ 개, ____ 반복 기준)

로딩 기준	순수 필요 단백질	여유분 포함 (약 1.5배)	이론적 최소 조직량
___ µg / lane	___ µg (__ × __)	약 _____ µg	______ mg

6. 분양 신청서 작성 서식

6-1. 1차 분양 신청 서식

신청 질환/대조군:

산출 기준에 따른 이론적 최소 조직량(mg):

확인할 marker:

질환군	확인할 marker	marker antibody 정보
	ex. GFAP	ex. antibody vendor, catalog number, dilution, expected band size(kDa) 등

6-2. 추가 분양 신청

1차 수행 내역: 1차 분양 case 및 획득한 protein 정보

1차 결과 요약: 주요 데이터

1차 결과 요약
- 유의미한 결과 유뮤: □ 있음 / □ 없음
- 주요 결과 요약:
- 제출 데이터 목록:
※ 유의미한 결과가 없더라도 실험 데이터 전체를 정리하여 반드시 제출하여야 합니다.

추가 필요 사유: (예: 1차 Western blot 분석에서 확인된 marker 발현 변화의 재현성 및 통계적 검증을 위해 추가 case 분석이 필요함)

추가 신청 질환/대조군:

산출표에 따른 이론적 최소 조직량(mg):

확인할 marker:

질환군	확인할 marker	marker antibody 정보
	ex. GFAP	ex. antibody vendor, catalog number, dilution, expected band size(kDa) 등

❸ FFPE slide 분양

1. FFPE slide 분양 기본 운영 원칙

1차 분양은 질환군별 최대 수량이 정해져 있습니다.
- 한 질환당 최대 3 case까지 신청 가능합니다.

1 case당 최대 3장까지 분양 가능합니다.
ex. AD 질환 군 신청 시,
BB25-aa: 3장 / BB25-bb: 3장 / BB25-cc: 3장

즉, 질환당 최대 9장(= 3 case × 3 slides)까지 1차 분양 가능합니다.

추가 분양은 반드시 데이터 제출 후 검토합니다.
추가 분양을 신청하려는 경우, 연구자는 1차 분양으로 수행한 실험 결과를 정리하여 제출하여야 합니다. 이때 결과는 유의미한 결과가 도출된 경우뿐 아니라, 유의미한 차이가 나타나지 않은 경우에도 동일하게 제출하여야 합니다.

2. 분양 신청 기준

[1차 분양 신청 기준]

질환당 최대 3 case

case당 최대 3 slides

따라서 질환당 최대 9 slides

[1차 분양 신청시 작성 필요 항목]

질환명

case별 신청 slide 수

확인할 marker list

각 marker를 어떤 목적으로 확인하는지

분석 방법 개요

예상되는 결과 활용 계획

[추가 분양 신청 기준]

※ 다음 조건을 모두 충족해야 합니다.

1차 분양 결과 데이터 제출

유의미한 결과 유무와 관계없이 전체 실험 자료 제출

추가 분석 필요성에 대한 구체적 설명

추가 분양 신청서 제출

추가 분양 산출식 작성 및 제출 (해당 서식)

3. 추가 분양 산출 기준 (Calculation Formula)

추가 분양은 아래 항목을 기준으로 산출합니다.

[Step 1] 추가 분석 대상 설정

추가 분석 대상은 아래를 기준으로 명확히 작성합니다.

추가 확인할 질환군

추가 확인할 case 수

추가 확인할 marker 수

case당 필요한 slide 수

[Step 2] 추가 필요 slide 수 계산

추가 필요 slide 수 = 추가 case 수  × case당 필요 slide 수

또는 marker 별로 구체화 하는 경우 아래와 같이 작성할 수 있습니다.

추가 필요 slide 수 = 각 marker별 필요 case 수 × case당 필요 slide 수를 계산한 후, 이를 모두 합산한 수량

※ 단, FFPE slide는 제한 자원이므로,

추가 분양 신청 시에는 단순히 “여러 marker를 보기 위함”이 아니라,

1차 결과를 바탕으로 왜 해당 marker를 추가로 확인해야 하는지를 반드시 함께 기술해야 합니다.

4. 분양 신청서 작성 서식

4-1. 1차 분양 신청 서식

신청 질환/대조군:

질환군	신청 n수	신청 slide 수	확인할 marker	분석 방법	이전 FFPE slide staining 경험 여부
			ex. MAP2	ex. IHC, IF	( O, X )

※ 1차 분양에서의 신청 n수는 최대 3례, 신청 slide 수는 최대 3장입니다.

※ 1차 분양에서 신청주신 질환군에 따른 case는 분양 심의 후 뇌은행에서 결정합니다.

4-2. 추가 분양 신청

1차 분양 질환군:

1차 분양 case name (ex. BB25-01):

1차 분양 시 수행한 marker list 및 수행 실험 개요:

1차 결과 요약
- 유의미한 결과 유뮤: □ 있음 / □ 없음
- 주요 결과 요약:
- 제출 데이터 목록:
※ 유의미한 결과가 없더라도 실험 데이터 전체를 정리하여 반드시 제출하여야 합니다.

추가 필요 사유: (예: : 1차 IHC/IF 분석에서 확인된 marker 발현 양상 및 병리 소견의 재현성 검증과 통계적 비교를 위해 추가 case 분석이 필요함)

추가 신청 질환/대조군:

질환군	신청 n수	총 신청 slide 수

산출표에 따른 이론적 최소 slide 수:

※ 신청 slide수는 위 산출 기준을 토대로 계산한 최소량을 작성해주시면 됩니다.

추가 확인할 marker:

확인할 marker	분석 방법	marker antibody 정보
ex. MAP2	ex. IHC, IF	ex. antibody vendor, catalog number, dilution 등